1）用作细胞培养的缓冲体系，常用工作浓度为10-25 mM；与无机碳酸氢盐缓冲系统相比，在组织或者器官培养中表现出更好的pH控制能力。不像碳酸氢盐，HEPES不为细胞供给营养。只有当需要长时间在CO2培养箱内处理细胞，才会加入培养基内以增强缓冲能力。

2）用作两性电解质溶液；HEPES能溶解两性电解质，制备＜1 pH单位宽度的pH梯度以用于等电聚焦电泳实验；

3）用作电镜观察蛋白沉积技术合适的缓冲体系，因HEPES不会对金属基板造成负面影响；

4）可用作定量和选择性测定抗原-抗体反应的缓冲试剂。