磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶是以一条单一肽链构成，相对分子质量为740千道尔顿的一种激酶。在磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶的催化下，草酰乙酸被转变为磷酸烯醇式丙酮酸和二氧化碳。该反应消耗一分子的鸟苷三磷酸以提供磷酰基。在糖异生作用中，此酶与丙酮酸羧化酶一起构成了从丙酮酸转化为磷酸烯醇丙酮酸的迂回步骤。

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶在植物和细菌中广泛存在，在动物及丝状霉菌中缺乏此酶。在植物的叶绿体和细菌的可溶性分级沉淀中存在。

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)催化磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)和HCO3-生成草酰乙酸(OAA)和无机磷酸的不可逆反应。