对二甲氨基苯甲酰肼可由对氨基苯甲酸乙酯为原料先制备对二甲氨基苯甲酸乙酯，然后用水合肼肼解后得到。有文献报道其可用于制备一种带永久电荷肼类糖标记物。

a、称取1g对氨基苯甲酸乙酯于二口圆底烧瓶中，加入40ml丙酮溶解，接着加入3.6g无水碳酸钾和14.1g碘甲烷，反应在氮气保护下于80℃搅拌回流24小时，反应完毕，过滤反应液，取滤液，用二氯甲烷萃取，有机相用硫酸镁除水，滤除硫酸镁后蒸发浓缩，产物用层析柱分离纯化(流动相二氯甲烷:甲醇＝20:1)，得到产物A。
b、在产物A中按1:20摩尔比加入80％水合肼，95％乙醇为溶剂，反应在氮气保护下90℃回流反应，反应完成后层析柱纯化(流动相二氯甲烷:甲醇＝20:1)得到产物B，即对二甲氨基苯甲酰肼。